通过在体递送CRISPR-Cas9核糖核蛋白治疗单基因和双基因显性遗传性听力损失

摘要

这项研究把内耳基因递送从基因替代（AAV）扩展到针对特定等位基因的基因编辑。通过脂质体在体递送CRISPR-Cas9核糖核蛋白复合物，专门破坏了显性的Tmc1 Beethoven突变，同时保留了健康的等位基因，从而保住了外毛细胞的存活和功能，并改善了听力。在一个同时携带Tmc1 Beethoven和Atp2b2 Oblivion突变的双基因模型中，双靶点的Cas9/sgRNA递送带来了部分听力恢复，表明这种方法可以扩展到单基因耳聋之外。

主要发现

• 通过脂质体递送的CRISPR-Cas9核糖核蛋白，在体选择性地编辑了显性Tmc1 Beethoven突变等位基因，保留了野生型等位基因。
• 与未治疗的突变小鼠相比，编辑保住了外毛细胞的存活和功能，改善了听阈。
• 在携带两个独立显性耳聋突变（Tmc1 Beethoven和Atp2b2 Oblivion）的双基因小鼠模型中，双靶点编辑带来了部分听力恢复。
• 证明以蛋白质（而不是病毒）形式递送基因编辑工具，是治疗显性遗传性听力损失的一条途径。